Durante la actividad de los posters tuve la oprtunidad de visitar 3 posters diferentes los cuales fueron de mucho interes y de intriga. Uno de ellos, de la estudiante Eva, trataba sobre la caracterizacion de bactrerias  que fueran capaces de tolerar y degradar cadenas largas y hidrocarburos aromaticos, lo cual ayudaria mucho en la situacion ambental en que estamos viviendo. Este posters presentaba la informacion de una manera clara y concisa, de tal forma que se facilitaba el entendimiento sobre el tema presentado. En adicion visite el poster de el estudiante J. Ortiz que era relacionado mas hacia el area medicina, el cual se trataba de el desarrollo de biosensores de acidos nucleicos para la deteccion de salmonella. Al igual que la primera estudiante, su poster era muy llamativo y muy bien redactado. El ultimo poster que visite fue uno que me intrigo mucho ya que no sabia nada sobre el tema estudiado. Este era de la busqueda de actividad de resistencia a antibioticos en una “Metagenomic Library”. Ya que no he cojido genetica, y este tema parecia estar directamente relacionado a ella, tuve la oportunidad de aprender que era esta libreria y como funcionaba para clasificar organismos segun su base genetica. En general pienso que esta actividad fue excelente para el desarrollo de los estudiantes como seres profesionales, dandonos la oprtunidad de pasar por la experiencia de ser evaluados por un arduo trabajo de 3 semestres.

Utilizando la escala de las metas que ya he cumplido que fueron trazadas al principio del semestre puedo decir que estoy entre el  4. De los tres experimentos que me propuse realizar, he completado exitosamente 1, mientras que estoy en el proceso de realizar una replica de uno, que se obtuvo buenos resultados, pero aun asi se busca una mayor exactitud y precision. Gracias a Dios, pude encontrar la raiz de mi problema a la hora de poner a Juana la Blanca in vitro. El problema resulto ser que Juana crece mucho mejor y sin hongos en un medio solido que no contenga sacarosa, ya que es la causa de que no se logre esterilizar y mantener libre de hongos los cultivos. Por lo cual todos los experimentos relacionados a esta planta, que se creo su propio medio de cultivo, sin azucar. Ya habiendo encontrado esto se realizara denuevo el experimento con TNT,que previamente se habia contaminado debido a sacarosa, para probar que Juana sirve como agente fitorremediador en suelos contaminados. Ya este experimento lo habia realizado pero con azucar por lo cual en el medio del experimento todo el stock cojio hongos. Aun asi Juana demostro absorber cantidades de 35 ppm en medio liquido. Aun falta mucho por realizar pero los resultados positivos se acercan cada dia mas… 

Trinitrotoluene (TNT) and its derivatives are common pollutants left on sites where explosives are used, stored or manufactured. This is a family of toxic compounds that damage the environment and induce severe diseases in human beings. Typical effects of nitroaromatic exposure include skin irritation and discoloration, anemia, and cancer. Phytoremediation is an alternative to remove such contaminants from soil. In this research project, Spermacoce assurgens, known as “Juana la Blanca”, has been selected as a target plant to remediate nitroaromatics contamination. Juana is a medicinal plant native to Puerto Rico used mostly to disintegrate kidney stones. Its decoctions are capable of complexing metals ions such as cadmium and calcium. The phytochemistry of this plant suggests strongly that Juana can be a potent phytoremediatior. The first objective of this research was to obtain enough plant clones for experimentation. After several trials using proper aseptic techniques and controlled environmental conditions, clones of the available mother plant were successfully grown in vitro free of bacteria and fungi. Plantlets were grown in standard Murashige and Skoog semisolid media with no sucrose added. The second objective was to expose plants to the principal nitroaromatic compound: trinitrotoluene (TNT). Plant clones were transferred to liquid growth media doped with 0 and 35 ppm TNT. Aliquots were collected periodically to quantify the amount of TNT remaining in the growing media.  Quantization was done by reversed phase HPLC (C-18, Inertsil, acetonitrile-water 60:40). After one weak no TNT was detected in the media. This result shows that Juana 1) survives in media contaminated with TNT and 2) may be a potential phytoremediator for TNT.

Como parte de este nuevo ano, hemos modificado y mejorado nuestros planes futuros y los experimentos que queremos lograr para final de este semestre. Espero haber logrado para este semestre lograr aislar Juana la Blanca de todo tipo de contaminacion que en la mayoria de los casos son colonias de hongos. Tambien deseo poder demostrar que esta planta puede ser usada como agente fitorremediador para suelos contaminados. Finalmente, se buscara probar la misma capacidad de fitoremediar en la baquina.

En relacion cuan ligados esta el trabajo realizado el semestre pasado en comparacion con este, debo decir que en realidad no estan muy relacionados. El semestre pasado se trabajo con Rubia contaminandola con Cadmio. Este semestre se hara lo mismo pero con Baquina. Ademas estare trabajando en varios proyectos simultaneamente entre los cuales estan buscar el medio apropiado con la cantidad debida de azucar que permita que la Juana crezca sin ningun contaminante o hongo dentro del medio. Para este se realizaran una serie de matrices para observar el comportamiento con 0 g, 12 g y 30 g de sacarosa. Este sera un pequeno proyecto que durara aproximadamente dos semanas. Tambien se esperara medir la absorbancia de Juana para TNT.

Entre las nuevas tecnicas que se aplicaran este semestre sera el uso de HPLC para medir la cantidad de cadmio que absorba la planta. Ademas se seguiran usando las tecnicas asepticas de siempre pero con aun mas rigidez. Espero que este semestre pueda terminar exitosamente este proyecto. 

A través de este  semestre, como he mencionado en mis otras entradas del blog, hemos experimentado serios problemas en el laboratorio. Esto ha atrasado la investigación en general, afectando la comprobación de la absortividad de Juana la  Blanca, que ha sido mi proyecto asignado desde el principio de biominds. Al final de este semestre logre recuperar varios stocks que se habían contaminado debido a que la puerta de la cámara que evitaba la entrada de bacterias y el crecimiento de hongos se quedo abierta. Estas plantas lucen muy saludables y están listas para hacer por lo menos un pequeño experimento con ellas antes de que se acabe este semestre escolar. Esto adelantara el transcurso del experimento con Juana. Mientras tanto, el experimento de Rubia con cadmio, se empezó esta semana y culminara antes de acabar el semestre. Aunque volvimos a confrontar problemas con el electrodo, esta vez se intercambio por completo las sustancias internas y externas y se pulió el electrodo. Después de esto la curva de calibración quedo perfecta. Ahora, se infectara el medio con el cadmio y se calibrara de nuevo para así poder trasplantar la Rubia para observar los primeros resultados y datos antes de empezar en receso. Aun queda mucho por hacer antes de acabar el semestre y estamos apretados en tiempo, por lo cual las medidas asépticas se practicaran al máximo para evitar errores que nos atrasen en nuestra investigación.

Entre las ideas propuestas para el  próximo semestre de nuestra investigación, siguen basando en la culminación de este proyecto de Fitoremediacion. Comprobar a través del HPLC y otros métodos que Juana la Blanca puede ser utilizada para absorber metales del suelo. Por consiguiente, espero aprender nuevas técnicas que amplíen mi conocimiento en el área de Fitoremediacion y de la Ciencia en general.  

Debido a los inconvenientes ya mencionados, mi proyecto con Juana la Blanca se ha atrasado mucho. Pero debo recalcar que poco a poco ya he empezado a crear un nuevo stock, que parece ser prometedor. Aun asi, ademas de seguir mi subcultivo para despues experimentar con cadmio en Juana, hemos parcialmente culimnado o resuelto uno de los problemas principales que teniamos con la mediacion y calibracion de cadmio que despues nos permitiria realizar el experimento en plantas. El problema resulto ser muy simple, el electrodo de cadmio estaba sucio. Lo que hicimos para resolver el problema limpiar el electrodo cambiandole la sustancia y lijando la punta del electrodo. Despues de una buena lavada, todas las graficas dieron con su debida pendiente y con la supuesta concentracion de cadmio al calibrarlo. Por lo cual, pudimos ampliar nuestras medidas asepticas y ver su importancia en nuestros experimentos. Mientras tanto, aumentare la cantidad del stock de Juana y empezar a calibrar su medio para obtener la absorcion de esta. Puedo decir que mi proyecto se ha empezado a realizar, ya que tengo todo lo necesario para realizar el experimento con cadmio. Diria que mi proyecto se ha completado  un 40%. Aunque a veces no vea los resultados inmediato en mi experimento, aun asi puedo decir que he aprendido mucha teoria, y mejor aun, la he puesto en practica. Ademas, he aprendido diferentes formas de como no se debe hacer este experimento.

Muchas de mis metas establecias en el primera entrada no se han realizado ni completado parcialmente. Personalmente, calificaria que estoy en el numero 2 de la escala del 1-5. Esto se debe a que desde el inicio del semestre he estado subcultivando Juana la Blanca para tener un Stock mas abundante para la experimentacion con el cadmio, y especificamente hoy, pude observar que la mayoria de las magentas y tubos de ensayo que contenian pequenas plantas de Juana que habia subcultivado, adquirieron hongo repentinamente. Entre las hipotesis y posibles causas de esto se puede mencionar un error humano, en el cual la camara ( donde se encuentran todas las plantas ya esterilizadas) se quedo abierto por mas de 3 dias. Mucha contaminacion pudo haber entrado en esos dias lo que pudo causar la evidente contaminacion. Como es de imaginarse tengo que crear un nuevo stock, lo cual me podra tomar semanas, para asi reanudar el proyecto Juana la Blanca. Pero no todo es negativo. En este periodo, se me ofrecio la oportunidad de experimentar con Rubia, para medir cuanta capacidad tiene de absorber cantidades de cadmio en un medio liquido. Se escojio esta planta ya que, a diferencia de la mia, esta completamente libre de contaminacion y crece facilmente en Medio liquido. Entre las nuevas tecnicas que he aprendido se encuentra realizar curvas de calibracion con cadmio con un electrodo que especificamente mide cadmio. Ademas, se utiliza el Ionic Strengh Adjustor para anadirle iones al agua para que empiece con la lectura el electrodo.Aun este proyecto esta desarrrollandose, realizando varias experimentaciones para encontrar un medio eficiente de como hacer una curva de calibracion precisa para luego anadirle el cadmio a la Rubia.

Después de un periodo de 6 meses para lograr conseguir el medio adecuado y las técnicas asépticas necesitadas para lograr un exitoso y abundante subcultivo de “Juana la Blanca”, podemos seguir con la parte más importante de esta investigación: contaminar el medio de Juana la Blanca con Cadmio para observar sus niveles de absorbancia relacionado con los metales. Relacionado a esto, espero poder culminar este proyecto con resultados positivos que luego puedan ser publicados y de uso para otros científicos. Además, espero ampliar mi conocimiento acerca de lo que es la fitoremediacion y diferentes técnicas útiles en estos tipos de investigación. Últimamente, espero que este proyecto abra paso a nuevas preguntas e interrogantes que puedan guiarnos a reducir la contaminación en los suelo.

La parte del experimento que se realizara este semestre, claramente está totalmente relacionada con la del semestre pasado, ya que sin un cultivo de plantas “Juana la Blanca” libre de contaminantes no sería posible medir los niveles de absorbancia. Esta parte será igualmente importante que la del semestre pasado, por lo cual nuestros métodos asépticos deberán ser igual de rigurosos como los del semestre pasado.

Este semestre usaremos las mismas técnicas que el semestre pasado, integrándolas con nuevos materiales como lo será la columna de cromatografía y HPLC, para conocer la absorbancia de las plantas, entre otros. Además, usaremos el indicador de cadmio para conocer su concentración. Nos relacionaremos más con el uso de graficas para medir y llevar un seguimiento de la planta.

A través del trabajo investigativo realizado este semestre, se logro realizar con éxito la subcultivacion de Juana la Blanca libre de algún tipo de hongo y contaminantes. Pero esto resulto ser un trabajo muy difícil de completar ya que fácilmente esta se contaminaba. Logramos afrontar esta barrera de contaminación orientándonos, a través de videos y referencias, diferentes técnicas asépticas para lograr el crecimiento de esta planta en un  medio solido. Además, recurrimos a la práctica de como subcultivar con mayor cautela y tomar las medidas de seguridad como lo son el gorro, los guantes y la mascarilla. Al completar esta primera fase de nuestra investigación, el semestre que viene proseguiremos con la contaminación del medio con Cadmio y TNT para así observar la habilidad de absorción de esta planta y concluir si Juana la Blanca puede ser usada para alguna tarea en Fitorremediacion.

En estos pasados dos meses hemos tratado de buscar nuevas tecnicas que nos ayuden a evitar que nuestras plantas no se contaminen al ser subcultivadas en las magentas. Al observar varios videos de las tecnicas asepticas y subcultivacion, pudimos observar que cosas hemos estado haciendo incorrectamente que pueden afectar el crecimiento de estas. Por ejemplo, hemos dado mas enfasis a la hora de autoclavar los instrumentos para asegurarnos de que todos esten debidamente esteriles. En la subcultivacion tenemos mayor cuidado colocandonos gorros y mascarillas, usando la posicion correcta para colocar la planta en la magenta. Ademas, ya hemos adquirido un mayor conocimiento de como modificar los medios de cultivo optimos para cada tipo de planta. A traves de todas estas tecnicas, hemos logrado mantener libre de hongos diferentes medios de cultivos de Juana la Blanca, Lipia y Rubia.

En cuanto a la visita de los blogs de tres compañeros asignados, me parecio muy interesante cada una de las investigaciones. Tuve la oportunidad de observar los diferentes campos de la ciencia en los que se estan realizando investigaciones y como estas pueden beneficiar y proveer nuevas conclusiones al mundo de la ciencia. Espero que cada uno de estos proyectos tengan exito.